咖啡糖上的DNA检验鉴定一例

曾于宝，王红波2 ，王智1

（1．玉溪市公安局，云南，玉溪 653100 ；2.昆明医学院法医学院，昆明 云南 650031）

摘要  口腔中有许多口腔上皮脱落细胞，当咖啡糖在口腔中停留一段时间后，糖表面都会附着有一定量的口腔上皮脱落细胞，将糖表面的口腔上皮脱落细胞经过提取、收集、消化得到DNA样本，再经过STR分型鉴定，获得了STR基因型。

关键词    咖啡糖；DNA  

DNA技术在生物物证检验上的应用，开辟了法医物证检验的新领域。经过十多年的发展，DNA检验技术的灵敏度显著提高，从微克级发展到纳克级以下的水平 ，大大提高了其解决微量、降解DNA的分析能力。对微量DNA进行检验能力的提高，拓宽了DNA检验的范围，使得许多潜在的DNA检材在侦查破案中能够发挥应有的价值 。本文对某案件现场中提取的一颗未吃完的咖啡糖上所含的DNA进行检验，获得了满意的效果，对下一步的嫌疑人认定提供了准确可靠的证据。

1 材料与方法

1.1咖啡糖样品

某县某镇一案件现场提取的一颗未吃完的咖啡糖按以下方法提取DNA：取适量咖啡糖，加无菌去离子水浸泡至糖完全溶解，重复漂洗4次，14000rpm离心5分钟，收集沉淀，加入100ul 5 %Chelex-100（BIO-RAD公司  美国）悬浮沉淀物，加入适量蛋白酶K，使终浓度为100ug/ml，56℃孵育6小时，沸水煮沸8分钟，剧烈振荡，10000rpm离心3分钟，取上清作为PCR模板使用。

1.2 STR试剂盒

本文采用AmpFI STR®IdentifilerTM试剂盒（美国ABI公司），该试剂盒包含D3S1358等15 STR位点和Amelogene性别位点。

1.3  DNA复合扩增

     PCR反应在8ul体系中进行，其中包含AmpFISTR  PCR  Reaction Mix 3ul，AmpFISTR Identifiler Primer Set 1.8ul，AmpliTaq Glod DNA Polymerase 0.2ul，咖啡糖模板DNA 3ul，复合扩增D8S1179，D21S11，D7S820，CSF1PO，D3S1358，TH01，D13S317，D16S539，D2S1338，D19S433，vWA，TPOX，D18S51，D5S818，FGA 15个位点和Amelogene性别位点。采用Perkin-Elmer GeneAmp® PCR System9700型PCR扩增仪，PCR的条件是：95℃ 预处理11 min→(94℃ 1 min→59℃ 1 min→72℃ 1 min)× 28次→60℃ 60 min→4℃保存。

1.4扩增产物分离检测

采用美国ABI公司3100-AVANT型DNA自动测序仪进行分离检测，电泳样品按下表配制，用Hi-Di Formamide 补充终体积至10 ul。AmpFISTR PCR产物或Allelic Ladder在95℃变性5 min，然后迅速置冰中冷却3 min。1ul PCR扩增产物中加入Genescan-500 LIZ  0.3ul，Hi-Di Formamid  8.7 ul，36cm 毛细管，60℃ 15KV 电泳40min  。用GeneMapperIDv3.1分析软件分析结果并自动比对，获得结果。（如图）

 

AmpFISTR Kit

PCR产物或

Allelic Ladder

Size Standard

Hi-Di

Formamide

 

Identifiler Kit

1ul

GeneScan-500  LIZ  Size

Standard：0.3ul

8.7ul

 

咖啡糖基因型STR图谱

 

 

 

 

 

 

 

 


2 结果

咖啡糖DNA样品经PCR扩增，扩增产物用美国ABI公司 3100-AVANT型DNA自动测序仪电泳分离、分型、判读，获得如下结果：

表1

 

D8S1179

D21S11

D7S820

CSF1PO

D3S1358

TH01

D13S317

D16S539

咖啡糖

13/14

30/31

11/11

10/11

16/17

9/9

8/11

12/14

 

表2

 

D2S1338

D19S433

vWA

TPOX

D18S51

Amelogenin

D5S818

FGA

咖啡糖

20/21

1313

14/16

8/9

13/14

X/X

10/11

24/25

3 讨  论

   对于各种潜在的生物物证，进行DNA检验时不能保证其成功率，但是，一旦成功地获得了现场物证的DNA分型，就能够成为破案的直接证据

对于潜在的DNA物证，检材的提取往往是关键。在提取过程中，1.是注意防止污染；2.要尽量少处理和触摸所要擦拭的区域；3.分区域进行检材的提取

由于不同于棉签、纱布之类的载体，糖本身易溶解，故在DNA提取过程中将糖完全溶解，使得糖表面附着的口腔上皮脱落细胞充分被提取出来。并且咖啡糖上附着的口腔上皮脱落细胞量具有相当的不确定性，量的多少与嫌疑人吃糖的习惯、糖在口腔中停留时间的长短、嫌疑人口腔的清洁程度等诸多因素有关。此外，咖啡糖成分也较复杂，糖完全溶解并多次漂洗离心有助于提高DNA模板的纯度。

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