利用Chelex－100检出腐败检材DNA
串并跨市强奸杀人案1例
孟娟，郗增新，王 洁
（新乡市公安局，河南 新乡 453000）
1案例简介
2006年1月我市发生一起强奸杀人未遂案件，受害人被用砖头砸击头部昏迷后，被人强奸。第二天，受害人被一农民发现，随即被120车送往医院，经抢救受害人终于醒了过来。在对受害人的阴道分泌物进行检验时，我们作出了一男性DNA分型。根据受害人描述当时案发的情况，及嫌疑人的体貌特征，经过大量排查，利用DNA最终锁定犯罪嫌疑人黄某。在对黄某的审问当中，其对自己的罪行供认不讳。
案件告破后，我省某市送来一案件，据侦察员讲述， 2002年4月他们市也发生了一起强奸杀人案件，作案手法与此案件相似，要求对当时现场提取的物证进行DNA检验，看能否并案。
2检材情况：
带有血迹的红白相间花格粗布床单一块。由于检材保存条件不好，血迹上已经出现了霉斑。据侦察员介绍，死者为一14岁女孩，血斑为女孩被强奸时，处女膜破裂所流的血迹。在对血斑进行初检时，精斑金标试纸条检验为阳性结果，染色后未检见精子。
3实验方法：
取2×2平方厘米的检材置于1.5mlEppendorf管中，加入1ml无菌水浸泡，在室温下20分钟，13000r/min离心3分钟，去上清液后，加入100ul10％Chelex－100；56度30分钟，剧烈振荡10秒钟，100度保温8分钟，剧烈震荡，13000r/min离心3分钟，得到DNA首次提取液，在首次DNA提取液里直接加入200ul10％Chelex－100混匀，56度保温30分钟，剧烈震荡10秒钟，100度保温8分钟，剧烈震荡，13000r/min离心3分钟，得到二次DNA提取液。
本实验中我保留了5ulChelex－100首次提取液，以做对照试验。
把首次DNA提取液与二次DNA提取液，进行9700扩增仪28个循环扩增，
4结果与体会：
本次试验，我采用了Chelex－100二次提取的方法。根据以往经验，已经发生了霉变的检材，用Chelex－100快速法提取DNA，大部分样本扩增受到严重抑制，不能检测到有效普带，少部分样本扩增时相当程度上受到抑制，仅能够检测到部分位点的普带，对案件起不了太大的作用。在接受此案件时，本人发现检材已经霉变，由于，在基层我实验室没有购买clean－up柱、Microcon－100柱、磁珠法等这些对DNA进行纯化的试剂，笔者就采用了Chelex－100二次提取法。笔者认为Chelex－100二次提取法，非常适合我们基层。由于基层办案经费有限，没有条件购买许多昂贵的试剂，运用这种方法不仅成本低，而且能够得到很好的检验效果。如上图所示，图1为DNA首次提取液得到的图谱，图2为DNA二次提取液得到的图谱。
本次试验在做床单上的斑迹检验时，得到了一个混合斑的图谱，除了受害人的基因分型外，还包含有嫌疑人黄某的基因分型。在这里笔者想就这一问题进行探讨，检材在经过第一次提取时，并没有加入DTT，来打开精子核膜坚固的二硫建，但在检验时也可以检测到男性成分，分析认为有2种可能，（1）在混合斑中作出的是精液中的男性上皮细胞成分。（2）做出的是精子核DNA。笔者认为，对于时间长腐败的精斑，随着检材的霉变，精子坚固的核膜也发生了降解，在提取过程中，不需要加入DTT，而是经过100度高温煮沸，Chelex－100对多价金属离子进行螯合，并且催化DNA释放，起到初步的消除抑制物与提取到较多量模板DNA的作用，再经过二次提取的操作，进一步螯合金属离子，在一定程度上去除了扩增抑制物，同时也稀释了模板DNA和模板DNA中的扩增抑制物，进一步减弱了抑制物对扩增的影响，从而取得较满意的检验效果。因此，笔者分析认为，Chelex－100二次提取法，对时间较长、腐败精斑的DNA提取，也有一定的检验效果。
【参考文献】
[1] Chelex－100法在腐败血痕DNA检验中的应用 刑事技术，2004年 第6期
河南省新乡市公安局刑警支队技术大队
孟娟
邮编：453000