杯口微量生物检材的DNA检验

陈玲，侯庆唐，杨玉玲

（合肥市公安局刑警支队技术处，合肥230001）

随着智能犯罪的日益增加，在犯罪现场越来越难发现明显的生物物证，同时由于犯罪分子在现场停留过，可能留下微量的血液、毛发、烟蒂、果核、饮料瓶，甚至是痰液、粪便等各种检材。对于附着于各种物体之上的微量的生物检材，是我们检验的难点，也是DNA检验的必须解决的问题。本文作者在日常检案过程中，曾于死者的指甲缝、乳房的咬痕中，提取到犯罪分子的DNA，起到了直接认定犯罪嫌疑人的作用。现将一起从现场的微量物证的检验中排除为嫌疑人所留的案件，报告如下：

1 简要案情

2006年1月16日晚，我市某小区的张某（女，50岁）被人杀死在自己家中保险柜旁。现场勘查的时候发现其家中门窗完好，分析可能是熟人作案，或者是敲门入室。现场客厅的茶几上有两个杯子，一个是瓷杯、一个是不锈钢杯，在厨房发现一个矿泉水瓶，瓶内还有一大半的水。现场还提取了血痕若干，死者的十枚指甲。办案单位要求检验其中是否有嫌疑人的DNA。

2 检验情况

按文献介绍的方法[1]，两个杯子和矿泉水瓶用两步提取法：先用少量润湿的脱脂棉轻轻擦拭杯（瓶）口的边缘下1cm范围，并擦拭一周；再用少量干的脱脂棉再擦拭一遍，将两次擦拭的脱脂棉放入一个1.5ml的离心管中。DNA提取用DNA IQTM试剂盒提取，具体方法为：先加入配置的裂解液100ul，放入95℃干热器中加热30分钟；取下离心管，用枪将溶液转移至另一个离心管中（注意要将脱脂棉中的溶液完全吸尽），加入7ul的树脂，在室温保温5分钟；将管放在磁架上，去除溶液，然后再用100 ul的配置的裂解液洗一遍，用100 ul的洗涤液洗三遍，在最后一步将洗涤液吸出后可将离心管进行短暂的离心，使得管壁上附着的洗涤液沉入管底，再吸出。打开盖子，在室温下干燥10分钟左右；最后加入50ul的洗脱液，在65℃干热器中加热5分钟后，立即将管放在磁架上将溶液吸出。扩增总体系为10 ul，样品加3 ul。其它检材用Chelex方法提取。经过检验，现场提取的血痕及死者的十枚指甲的擦拭物检出的基因型均与死者一致，而瓷杯、不锈钢杯、矿泉水瓶上检出的基因型，却与死者不一致，检验结果见表一。1号为死者血，2号、3号分别为不锈刚杯和瓷杯，4号为矿泉水瓶，5号为死者丈夫。

表1：现场检材、死者及其丈夫的基因型

编号

D3S1358

TH01

D21S11

D18S51

PentaE

D5S818

D13S317

D7S820

1号

16/17

7

29/30.3

13/14

12/16

12/14

9/13

11/12

2号

15/16/17

7/9

29/30/30.3

13/14

11/12/16

11/12/14

8/9/11/13

10/11/12

3号

15/16/17

7/9

29/30/30.3

13/14

11/12/16

11/12/14

8/9/11/13

10/11/12

4号

15/17

9

30

13

11

11/12

8/11

10/12

5号

15/17

9

30

13

11

11/12

8/11

10/12

 

D16S539

CSF1PO

PentaD

Amelo

vWA

D8S1179

TPOX

FGA

1号

11/13

10/11

11/12

X

14/16

11/13

8

22/24

2号

9/11/13

10/11/12/14

11/12

X/Y

14/16/17

11/12/13/15

8/11

21.2/22/24

3号

9/11/13

10/11/12/14

11/12

X/Y

14/16/17

11/12/13/15

8/11

21.2/22/24

4号

9/11

12/14

11/12

X/Y

14/17

12/15

8/11

21.2/24

5号

9/11

12/14

11/12

X/Y

14/17

12/15

8/11

21.2/24

从上表可以看出，瓷杯和不锈钢杯的杯口擦拭物均检出的是混合基因型，而矿泉水瓶的瓶口擦拭物检出的是一男子，刚开始我们以为可能是犯罪嫌疑人所留，但经与上述混合基因型相比较，才发现上述混合基因型里包含了这名男子的基因型，同时也包含了死者的基因型。那么可以判定这名男子与死者的关系密切，但却不是死者的儿子，那么很可能就是死者的丈夫。后经检验证实，确实为死者的丈夫。

3 讨论

人的唇分为上唇和下唇，唇外面为皮肤，唇内面为粘膜，唇粘膜显露于外面的部分称为唇红[2]。唇粘膜的组织结构与皮肤相似，由上皮和结缔组织组成。一般来说，口腔上皮的更新速度比皮肤的表皮快[3]。所以对于口腔及唇部接触的部位，其潜在的DNA是不容忽视的，需要现场勘验时加以仔细观察和提取。饮用的杯子除了留有使用者的唇部粘膜脱落的上皮细胞以外，可能还留有其唾液斑，尤其是对于口径较小的饮料瓶。对于微量的生物检材，难以判断其DNA含量的多少。这就要求我们在提取前对常用的DNA提取方法如：Chelex法、Chelex+有机法、Chelex+纯化法、DNA IQ法等多种方法进行筛选，针对载体的不同，考虑其中可能存在的杂质或污染的成分，合理选定提取方法，以便为下一步的扩增提供保证。Chelex法操作简便、快速，但纯度底，含有大量酶抑制剂；有机法复杂，步骤多，虽纯度高但回收率低[4]，DNA IQ试剂盒使用特定的磁化树脂来纯化DNA，无需长时间洗涤步骤来除去裂解试剂。另外，这些磁化树脂颗粒捕获DNA后不会结团。这一系统用于大约100ng或更少量DNA的快速纯化。当样品中DNA含量少于50ng时，它具有更高的DNA分离纯化效率[5]。

本文案例中的两个杯子后经证实为死者家中常用物品，由于死者及其丈夫两个人都用过这两个杯子，所以留下了两个人的DNA。那么，这就要求我们在检验之前，对检材在现场的情况有一定的了解：杯子平时被饮用的情况，案发时杯子的位置、里面所盛的液体的种类及多少，杯子被犯罪嫌疑人饮用的可能性等等。对于家中常用的杯子，不同部位可能有不同的接触者，为了最大程度地获得现场物证的证据价值，建议分不同部位进行检材的提取，争取获得单一的基因分型。对于检验结果，要在先排除家中亲属的情况下，才能肯定为犯罪嫌疑人所留。本案由于死者家中矛盾突出，案发后其丈夫及儿子也被列为嫌疑对象，故检验前对两个杯子及矿泉水瓶的饮用情况并不了解。

【参 考 文 献】

[1] 陈松等  微量DNA：容易忽略的生物检材   第二届全国法医DNA检验技术交流会论文集   2004， 43-44

[2] 毛祖彝  口腔科学[M]  北京：人民卫生出版社  1988，3

[3] 樊明文  口腔生物学（第二版）  北京：人民卫生出版社  2004：34-41

[4] 郑秀芬，凌凤俊等  模板DNA磁珠提取法  中国法医学杂志  2003，18（2）：107

[5] 叶健、季安全、赵兴春等  烧骨DNA检验技术的研究  法医学杂志  2004， 20（3）155-158

 

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