口腔脱落细胞DNA检验在刑事案件中的应用

徐庆，高金林，戴小兵，裴军昌

（泰州市公安局刑警支队，江苏 泰州225300）

 

摘要：本文报道了3起利用口腔脱落细胞成功进行DNA检验的案例，介绍了这类检材DNA检验的方法，并对其中一些事项进行了探讨。这些案例表明，口腔脱落细胞DNA检验可以在刑事案件中发挥重要的作用。

关键词：口腔脱落细胞  DNA检验  刑事技术

烟蒂、唾液斑等含有口腔脱落细胞的微量物证检材，在各类案件中具有较为广泛的分布，口腔脱落细胞DNA检验，已成为法庭中生物物证鉴定的重要内容。我局DNA实验室自运转以来，受理了烟蒂、唾液斑等一系列含有口腔脱落细胞的微量物证检材，经过认真的实验和分析，在泰州地区的刑事案件侦察、侦破中起了积极的作用。本文就几个典型案例，进行了研究和分析，报告如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1样本  1号检材：2004年4月至2005年4月，兴化市发生多起乡镇政府被盗案。2005年4月15日凌晨，兴化市林湖乡政府又发生一起盗窃案，勘查人员在现场提取“玉溪”牌香烟烟蒂1枚（本文中编为1号检材），下文简称案例1。2、3号检材：2005年5月22日晚，泰兴市某驾校教练王磊驾驶苏M0296学教练车沿泰兴市大庆东路由东向西行至东润路口时，与步行的耿鹏飞（本文中其送检心血编为2号检材）发生事故，后王磊驾车逃逸。王磊在被办案民警讯问中拒不承认交通肇事的事实，案情呈胶着状态，后技术人员对王磊驾驶车辆进行了仔细的勘查，终于在该车前挡板上发现少许可疑斑迹（本文中编为3号检材），疑为受害者被撞时口中洒落的唾液，送至DNA实验室进行DNA检验，下文简称案例2。4、5号检材：2005年8月4日凌晨,泰州市扬州路314号烟酒日杂店被人揭顶入室盗窃。现场有一瓶芬达饮料（编为4号检材）有被人打开并喝过的迹象，地上遗留一塑料香烟过滤嘴（编为5号检材），下文简称案例3。

1.1.2试剂   Profiler Plus试剂盒（ABI公司），金牌Taq酶，Chelex-100等。

1.1.3 主要仪器设备   ABI-3100A测序仪、9700扩增仪等。

1.2方法

1.2.1 模板DNA的制备  按本文3中方法对上述案例中检材处理，用5%的Chelex-100提取DNA。

1.2.2 Profiler Plus试剂盒复合扩增  采用10ul扩增体系，模板DNA量为1-4ul。

1.2.3扩增产物的分离及检测  使用ABI-3100A测序仪进行电泳分离，结果分析使用GeneMapper V3.1软件判断样品的基因型。

2结 果

本文中各检材DNA基因分型检验结果如表1所示。其中， 4号和5号检材在模板DNA用量为3ul时检验无结果，在模板用量为1ul时DNA分型一致，应为嫌疑人所留。而１号检材DNA分型和江都某系列盗窃案DNA检验结果比对一致，因而与该案成功串并。此外，2号检材与3号检材DNA分型一致，因而王磊车辆被认定为肇事车辆，在证据面前，王磊交代了交通肇事事实。

表1 各检材DNA基因分型检测结果

检材    模板用量   D3S1358  vWA    FGA  D8S1179    D21S11   D18S51   D5S818  D13S317  D7S820   Amelo

1号检材    1ul        14/16   16/19    21     10/13     29/32.2     13/20     12/13      8       11       x/y

2号检材    1ul       16     16/17    24     10/12     30/32.2     14/16     11/12     8/11     9/12      x/y

 3号检材    1ul       16     16/17    24     10/12     30/32.2     14/16     11/12     8/11     9/12      x/y 

4号检材    3ul        -     -     -      -      -      -     -     -    -     -

5号检材    3ul        -     -     -      -      -      -     -     -    -     -

 4号检材    1ul        17/18   17/18   21/23     12      29/31       15      11/13     9/12     9/12       x/y

 5号检材    1ul        17/18   17/18   21/23     12      29/31       15      11/13     9/12     9/12       x/y

3讨 论

烟蒂、唾液斑、矿泉水瓶等检材含有口腔脱落细胞，提取到这类有核细胞中的DNA，对其进行特异性扩增，就可检测被检样本的STR基因分型。提取烟蒂中DNA，可直接剪取与口唇接触较多的部位，根据污染程度采用Chelex法或硅珠法处理，只要处理恰当，总能取得较好的效果。1号检材污染不严重，但用Chelex法和硅珠法提取后效果均不好，推测原因应非扩增抑制剂的影响而可能是抽烟者的习惯导致该检材DNA含量偏少，故对Chelex法的提取液用Microcon-100纯化柱浓缩，检验取得成功。提取矿泉水瓶、茶杯等检材上口腔脱落细胞DNA可采用1厘米棉线，去离子水浸湿，轻轻擦拭与口唇接触较多的部位，也可用推荐的两根纱线法提取。

DNA检验的结果，不能就事论是简单分析，应该结合本案案情及其他案件的信息来比对和分析。案例1中，DNA检验结果通过与江都系列盗窃案DNA检验结果的比对，实现了与该案件的串并，为案件侦察提供了新的方向。DNA数据库的建立和规模的扩大，为案件侦破、串并提供了大量的线索和证据，充分利用DNA数据库将使DNA检验在案件侦察中发挥更大的作用。

微量物证在案件的侦察侦破中往往起着关键的作用。案例2中，虽有某出租车司机的证词，但由于事发晚上，肇事司机矢口否认，使得DNA物证的提取和检验成为关键。这就要求侦技人员在思想上要高度重视微量生物检材在案件侦察侦破中所起的作用，要求技术人员特别是现场勘查人员要认真学习和掌握各类微量生物检材的知识，在进行现场勘查的时候，应尽量发现各种可利用的微量生物检材，注意将其收集和提取，并根据不同情况采用不同的方法分别予以处理，以使法医物证在法庭科学中发挥更加有效的作用。

口腔脱落细胞用于DNA的检验，常见困难在于检材中DNA含量少，难以达到PCR扩增所需的模板量。因此在用Chelex法提取DNA时，为提高模板DNA的浓度，5%Chelex-100应少量添加；扩增时，DNA模板尽量多加，并相应减少超纯水用量。但在模板DNA浓度增加的同时，扩增抑制剂的浓度也在增加，将会抑制扩增的效果。案例3中，在提取DNA时，Chelex-100溶液仅加到覆盖检材为止，在扩增时，模板DNA用量为3ul时，检验效果不理想，考虑到检材的条件，推测可能较高浓度的抑制剂影响了PCR的扩增，据此减少扩增时模板DNA的用量到1ul时，实验取得了较好的结果。因此，在提取这类检材的DNA时，既要考虑DNA浓度，也要评估抑制剂的影响，提取的模板DNA溶液可稀释不同倍数梯度扩增，也可采用纯化柱纯化后再梯度扩增，可最大限度地减少抑制剂的干扰，使实验取得较好的结果。

【参考文献】

[1] 任贺，张庆霞，等. 杯口边缘附着微量口唇脱落细胞的检验. 刑事技术，2004, (6):10-12.

[2] 张庆霞，刘雅诚，唐晖，等. 烟蒂DNA分型的研究. 中国法医学杂志，2003, 18 (1)：27-28.

[3] 王林生,苏勇,顾林岗,等. 硅珠法提取PCR模板DNA.中国法医学杂志，2000,15 (1)：36-37.

 

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