建立DNA数据库的一种检验方法

潘永峰

（沈阳市公安局刑事警察支队， 辽宁 沈阳 110002）

摘要：应用8道移液器、96孔板、96孔板离心机等设备建立了一种检验方法，可以对批量血样进行检验，节省人力，有效避免人为失误，是一种相对简便可行的建立DNA数据库的检验方法。

关键词：DNA；数据库；检验

法庭科学DNA数据库是继指纹数据库后又一个可以进行个体认定的数据库，已经逐步成为法医DNA工作的重点，全国公安机关根据公安部要求开始着手建立DNA数据库，随着库容的不断增加，DNA数据库在侦破案件上必将发挥重要作用。但是，在建库时要对批量检材进行检验，首选方法是应用全自动DNA提取工作站，但现在具备该仪器的实验室并不多。笔者根据本地实验室仪器配置情况，建立了一种检验方法，具有一定实用价值。

1材料与方法

1.1 样品

干血滤纸，均采自看守所在押人员。

1.2 试剂和仪器

10ug/ul蛋白酶K。5% Chelex100溶液。ABI AmpFLSTR Identifiler PCR Amplification Kit。Axygen PCR Microplate (96孔)。200ul Gilson pipetman 8道移液器（200ul×8）。20ul Gilson pipetman 8道移液器（20ul×8）。ABI GeneAmp PCR System2700型扩增仪 。ABI 3100A Genetic Analyzer。Heraeus Labofuge 400 型96孔板离心机。

磁力搅拌器。旋涡震荡器等。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取 a)配制蛋白酶K -Chelex100溶液：按每100ul 5%Chelex100溶液含有4ul 10ug/ul蛋白酶K配制50ml放于100ml 宽口容器内并置于磁力搅拌器上低速搅拌。b)用200ul Gilson pipetman 8道移液器（200ul×8）移取蛋白酶K -Chelex100溶液到Axygen PCR Microplate 96孔板中。c) 剪取干血滤纸3mm² 分别置于Axygen PCR Microplate 96孔板中，并做好记录。d）在Axygen PCR Microplate 96孔板上盖上适合的联排管帽（一排8个）。并置于ABI GeneAmp PCR System2700型扩增仪 中：56℃ 60分钟，之后95℃30分钟 ，旋涡震荡e）之后置于Heraeus Labofuge 400 型96孔板离心机离心。

1.3.2 PCR扩增及检测 用ABI AmpFLSTR Identifiler PCR Amplification Kit 扩增，体系10ul置于Axygen PCR Microplate 96孔板中，盖上联排管帽，加样用Gilson pipetman 8道移液器。检测用ABI 3100A Genetic Analyzer基因分析仪，上样用Gilson pipetman 8道移液器。

2 结果及分析

该法提取276份血样，11份血样检测RFU值在100-400（3.99%），257份RFU值在400以上（93.12%），8份RFU值低于100不好分析（2.89%）。DNA提取、扩增、检测均设立阴性、阳性对照，未见污染。

3 讨 论

本文建立方法主要是应用8道移液器、Axygen PCR Microplate 96孔板、Heraeus Labofuge 400 型96孔板离心机等设备对批量血样进行检验。在检验时每个96孔板放入样品92个，余下4个为阴性、阳性对照。配制的蛋白酶K -Chelex100溶液可在4℃冰箱中存放一周，最好在一周内用完。

本方法适于对大量样本进行批量检验，由于在DNA提取、扩增、检测时均使用 96孔板，可以避免样品编号不对应，有效避免人为失误；使用8道移液器工作起来更加方便轻松，避免样品前后次序错误。本方法在没有全自动DNA提取工作站时，对海量样本的处理是一种相对简便可行的方法。

（潘永峰电话：13332448158、024-23106781；E-mail: pandavid@sina.com;）

（单位地址：沈阳市和平区市府大路167号沈阳市公安局刑警支队，邮编：110002）

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