亲子鉴定中Amelogenin基因座突变1例

张贵芹1，裴黎2，马福贵3， 马原1 ，郭佳1

(1．中国人民公安大学, 北京100038，2.公安部物证鉴定中心, 北京100038，

3.赤峰市，内蒙古 赤峰002400 )

在无名尸或碎尸案件的尸源认定过程中，尸体的性别认定有助于案件的侦破。自20世纪80年代中期用DNA技术鉴定性别以来，各国学者相继报道了关于Y染色体的特异DNA探针杂交以及扩增特异DNA序列等多种方法来检测性别。20世纪90年代以后开始用PCR技术相继扩增了X、Y染色体特异DNA片段来鉴定性别。通过AMEL基因座与STR基因座复合扩增方法进行DNA分析来鉴定性别，尤其是AMEL基因的检测具有准确、微量等优点，目前已成为法医物证鉴定的主流技术之一，由于STR基因座突变几率较高，在亲子鉴定以及尸源认定中已引起人们足够的重视，而AMEL基因座突变几率较低，在实际检案中较罕见，国内外报道也较少。笔者在实际检案过程中遇到AMEL基因座突变1例，现报道如下：

1 案例资料

1.1简要案情

某日，某地医院一无名男性死亡。当地公安机关送其血样要求DNA检验。

1.2检验方法及结果

1.2.1提取[1]  从纱布上剪取血斑0.5cm2置于0.5ml管中，加入400µl去离子水，混匀，室温放置30min以上；13 000r/min离心5min，弃上清液，重复2次；加入5％Chelex－100 200µl、PK（2mg/mL）少量，56℃保温30min以上，振荡；100℃煮沸8min，振荡，13 000r/min离心5min；4℃保存备用。

1.2.2 PCR扩增  使用10µl反应体系，将提取液用ABI Identifiler kit于9700扩增仪(Perkin-Elmer公司) 同时扩增15个位点和性别基因座。扩增产物取1µl，使用3100型遗传分析仪(Perkin-Elmer公司)检测，具体方法见试剂盒使用说明书。

1.2.3 STR分型  使用GeneScan3.7基因扫描软件(ABI公司)分析片段大小,Genetyper3.7分析软件(ABI公司)得到男尸血样的STR分型（表1）。

表1某男尸血样STR分型结果

D8S1179

D21S11

D7S820

CSF1PO

D3S1358

TH01

D13S317

D16S539

12/13

30/32.2

11/13

10/12

10/12

7/8

10

11

D2S1338

D19S433

vWA

TPOX

D18S51

AMEL

D5S818

FGA

18/25

13/14.2

14/19

8

13/14

Y

10/13

23/24

2  讨 论

牙釉质蛋白基因(amelogenin)位于X染色体Xp22，编码原牙釉质蛋白，为X、Y染色体共有[2]。目前的研究表明，AMEL基因座突变多发生于男性，常表现为XX或YY。由于不同厂家试剂盒引物序列不同，若避开了引物结合区突变点，相同基因座有可能扩增出不同产物[3,4]，当AMEL基因座检验结果与案情不符时，应先向送检单位详细了解情况，同时在检验过程中可以更换不同公司试剂盒或检验Y-STR基因座以确定AMEL基因座的确发生突变。按父系遗传的规律，Y染色体特异基因座上的等位基因是单倍体，序列结构能够稳定地由父亲传递给儿子。Y染色体的这种特性在个人识别、父权鉴定中均具有一定意义。因此当AMEL基因座发生突变时，可用Y-STR系统来检测。随着当今科学技术的飞速发展，通过骨髓移植治疗恶性血液病使不少患者已能得到彻底治愈。异体移植时，造血干细胞移植后患者血液系统的DNA多态性与供者一致，包括AMEL基因。如患者为女性，而供者是男性时，在接受移植前AMEL基因表现为XX，接受治疗后AMEL基因型应为XY[5]。在实际检案中，对于与案情不符的AMEL基因位点检测结果，还要考虑被检测者的样品是否来自变性人的个体，或被检测的个体是否患有肿瘤。国内学者曾报道在肿瘤组织中检测出AMEL基因座由XY突变为XX[6]。在本例案件获得STR分型结果后，笔者经与送检单位联系，再次检查该男性尸体，尸表检查外部男性性征以及解剖检查体内男性生理特征均确凿、明晰，与我们检验的AMEL基因座突变的结论相吻合。由此，通过本案例的检测我们体会到：虽然商品化试剂盒具有通用性，但由于不同个体可能在某一基因座发生了点突变，将会影响检验结果的正确判断，这一点应该引起我们检验者的重视。

【参考文献】

[1] 裴黎. 现代DNA分析技术理论与方法[M].第一版.北京: 中国人民公安大学出版社, 2002: 130-131.

[2] 郭景元，李伯龄.中国刑事科学技术大全(法医物证学分册)[ M].第一版.北京:中国人民公安大学出版社,2002:619-626.

[3] Thangaraj K, Reddy AG, Singh L. Is the amelogenin gene reliable for gender  identification in forensic casework and prenatal diagnosis?[J].Int legal Med, 2002,116:121-123.

[4] Steinlechner M, Berger B, Niederstatter H, et a1.Rare failures in the amelogenin sex test [J].Int legal Med,2002,116:117-120.

[5] 周怀谷，平原，顾丽华，等.骨髓移植引出的个体识别问题[C].第四届全国物证技术破案研讨会暨首届全国声纹鉴定技术交流会，北京：471-474.

[6] 刘开会,王占海,季安全,等.肿瘤组织9个STR基因座及Amelogenin基因座突变[J].法医学杂志,2002 ,27 (2):81-84.

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