1例混有大量月经血的混合斑DNA快速检验案例报道

廖勤1，王春雨1，严江伟2，张存国3

（1．唐山市公安局刑警支队，河北 唐山 063000；

2．北京市公安局法医检验鉴定中心，北京 100085；

3．迁安市公安局，河北 唐山 063000）

【  关键词】法医物证学；混合斑；月经血；DNA； 快速检验

本文通过1例杀人强奸案的检验，对混有大量月经血的混合斑的DNA进行快速检验方法给予总结报道。

1资料与方法

1.1  资料

简要案情   2005年8月19日中午12时左右，某村玉米地里发现一具裸体女尸，杨某（女，20岁），经检验系扼颈致机械性死亡。提取混有大量月经血的阴道擦拭拭子，镜检检见精子。经大量摸排查工作，怀疑离死者现场附近邻村的姜某（男，30岁）有重大嫌疑，随采集嫌疑人姜某血迹，连同死者心血与阴道擦拭物送检DNA，笔者仅用7-8h快速检出混合斑的DNA基因型。结果与嫌疑人姜某DNA基因分型认定同一，快速认定本案的犯罪嫌疑人。

1.2检验方法

阴道擦拭物经四碘荧光红快速染色，高倍镜下检见大量精子。分取阴道擦拭拭子1×2cm2大小两份，分别加TES1000ul,10%SDS100ul,10mg/mlPK10ul，快速提取精斑DNA,37°C消化1h及2h。用TES缓冲液洗3次，最后一次离心沉渣镜检。一步消化1h后经二步消化3h的样品用PLG有机法抽提DNA,即饱和酚：氯仿：异戊醇用量比例为25：24：1，混匀后加入装有树脂的PLG管中400 ul，充分摇匀，最后加入一步消化液，再充分摇匀，然后离心12500r/min,2min ,吸取上清; 一步消化2h后经二步消化3h的样品用常规酚氯仿有机法抽提DNA。Promega Powerplex 16 System试剂盒扩增,ABI3100电泳判型。

2结果与讨论

在死者杨某阴道擦拭物中成功快速检出精斑基因型。混有大量月经血的阴道擦拭物经一步消化1h及2h镜检均无女性上皮细胞，均有多量精子。一步消化1h的阴道拭子经二步消化3h后，用PLG有机法快速提取精斑DNA，此过程只需3分钟，整个混合斑提取过程仅需4h，一步消化2h的阴道拭子经二步消化3h后，经常规酚氯仿有机法抽提DNA，整个混合斑提取过程约需8h，最后混合斑检测结果均为单一的精斑基因型；与嫌疑人姜某的基因型认定同一,(见图一)。

在日常实际检案中，阴道分泌物与精斑的混合斑通常采用二步消化法［1］，检测时女性上皮细胞和精子常常分离不完全，这时就需在二步消化后至少反复抽提3次，每次抽提需30-40分钟，反复抽提不仅需要大量时间［2］，而且又容易丢失精子DNA，这样很容易使精子DNA检出率降低，导致检测出的精斑基因型不完全或未检出，给判定案件性质提供错误的依据，以致导致冤假错案的发生。笔者在二步消化后用PLG有机法快速提取精斑DNA，其优点是相锁定胶可以在水相和有机相之间形成一个隔离层，这使得在提取过程中吸取水相变得简单而快速，并且最大程度地减少吸入蛋白和杂质。有研究表明，使用PLG结合传统的有机提取法可以提高20－30%提取效率［3］。本方法中消化体系为400ul，仅需抽提一次，耗时3分钟，既达到了快速，又减少了精子DNA的丢失，还节省了试剂及各种耗材的的大量消耗，可为侦查破案快速提供科学而有力的证据，笔者认为此方法值得推广。

①

②

③

图1 阴道擦拭拭子上精斑及嫌疑人血斑STR分型结果。

①PLG有机法快速提取精斑DNA的STR分型；②常规有机法提取精斑DNA的STR分型；③嫌疑人姜某STR分型结果。

【参考文献】

[1] 郑秀芬.法医DNA分析[M].北京：中国公安大学出版社，2002.4.39.

[2] 杜舟，徐振波.1例系列强奸杀人案混合斑DNA检验.中国法医学杂志[J].2005,20(2):123-124.

[3] Murphy, N.R. and Hellwig, R.i.(1996) Improved nucleiric acid organic extraction through use of a unique gel barrier matrix. BioTechniques 21:474-481

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